Информация - Ветеринарная терапия
Она разрывает стенки бронхов и альвеол и вытекает из трахеи, где собирается, а затем концентрируется при процеживании через сито (диаметр отверстия 38 pm). Лучше материал исследовать сразу же.
Извлечение и подсчет меньших по размеру легочных гельминтов мелких жвачных животных проводить сложнее, хотя может применяться методика Индербитцена.
Извлечение трематод и цестод
При исследовании на наличие фасциол и дикроцелий печень удаляется и разрезается на дольки толщиной в 1 см, при сжатии этих долек гельминты выдавливаются, их собирают и консервируют. Дольки печени погружают в теплую воду, где оставляют на ночь. Желчный пузырь также вскрывают и промывают, а гельминтов выбирают.
После того как дольки печени пролежали в воде, их снова сдавливают, промывают в чистой воде и выбрасывают. Воду от промывания процеживают через сито (диаметр отверстий 100 цт), а остаток консервируют в формалине. При кишечных парамфистомах первые 4 м двенадцатиперстной кишки следует перевязать, затем вскрыть, промыть и исследовать на наличие трематод.
Подсчет проводится под микроскопом. Учитывается число целых трематод, а также количество головных и хвостовых концов. Наибольшее число головных или хвостовых концов складывается с числом целых нематод.
Цестоды обычно хорошо заметны в кишечнике или печени, но по возможности их следует извлекать аккуратно, так, чтобы головные концы и зрелые сегменты, а также сегменты с яйцами были доступны для специального исследования. Однако в случае Echinococcus у собачьих гельминты такие небольшие, что их исследование следует провести более детально, как описано в ниже.
Другие методы диагностики
Имеется две другие методики для диагностики трихострогилид жвачных животных. Первая — исследование пепсиногена плазмы, а вторая — подсчет инвазионных личинок на пастбище.
Оба этих метода обычно не используются в ежедневной практической деятельности, но здесь приводится короткий обзор необходимых материалов для проведения этих тестов, основные этапы их проведения и принципы интерпретации результатов.
Исследование пепсиногена плазмы
Подсчет циркулирующего пепсиногена применяется при диагностике паразитарных заболеваний сычуга, а особенно остертагиоза. Также этот метод проводят при других паразитах желудка, например, Trichostrongylus axei, Haemonchus contortus и у свиней — Hyostrongylus rubidus.
Образец сыворотки или плазмы подкисляется до рН 2,0, таким образом, активизируется неактивный зимоген, пепсиноген для активации протеолитического фермента пепсина. Этот активированный пепсин затем реагирует с белковым субстратом (обычно сывороточным альбумином крупного рогатого скота), а концентрация фермента подсчитывается в международных единицах (рмоль тирозина, высвобождаемого на 100 мл сыворотки в минуту). Тирозин освобождается из белкового субстата пепсином и обнаруживается по синему цвету, который образуется при реакции фенольных соединений с реагентом Фолин—Чокалт. Для проведения теста необходимо 1,5 мл сыворотки или плазмы. В качестве коагулянта используется ЭДТА или гепарин.
При гастритах жвачных животных при пара-зитировании Ostertagia spp. и Т. axei уровень пепсиногена плазмы повышается. У животных, у которых инвазия паразитами отсутствует, уровень тирозина менее 1,0 ME; у умеренно инвазированных животных этот показатель составляет 1,0—2,0. При сильной инвазии он превышает 3,0 и достигает 10,0 или более. Интерпретация результатов проста, если возраст животных не более 18 месяцев, но впоследствии затрудняется, так как может повышаться. В таких случаях отсутствие классической клинической картины диареи и потерь веса указывает на то, что инвазия небольшая.
Подсчет личинок на пастбище
Для проведения данного метода собираются образцы травы с пастбища и помещаются в полиэтиленовый пакет, который затем отправляется в лабораторию. Важно собирать траву с различных участков пастбища. Можно, пересекая его, отбирать по 4 образца травы через каждые 4 шага до тех пор, пока не будет собрано 400. Также можно собирать примерно такое же число образцов около фекальных лепешек, что прежде всего необходимо диагностики личинок диктиокаулюсов. В лаборатории трава тщательно вымачивается, промывается и высушивается. Жидкость, содержащая личинок, пропускается через сито (диаметр отверстия 38 рт; 600 на 2,54 см2) с целью удаления примесей. Затем материал подготавливается к исследованию по методике Бермана, личинки исследуются и подсчитываются под микроскопом под большим увеличением. Результат подсчета выражается, как число личинок 3-й стадии на 1 кг сухой травы.
Если число личинок трихостронгилид желудочно-кишечного тракта жвачных животных превышает 1000 личинок 3-й стадии на 1 кг травы, пастбище считается умеренно инфектив-ным, а более 5000 личинок — может вызвать клинически протекающее заболевание у молодого крупного рогатого скота во время первого пастбищного сезона.
Однако для определения легочных гельминтов эта методика менее приемлема из-за быстрой изменчивости этих личинок на пастбище. Для этого используется метод Йоргенсона, который основывается на миграции паразитов через агар, содержащий желчь. Так как личинки большинства легочных гельминтов располагаются около фекалий, образцы травы следует собирать вокруг них. Но следует помнить, что даже негативный результат не всегда означает, что пастбище не контаминировано.
Эктопаразиты
Членистоногие, имеющие ветеринарное значение, разделяются на 2 основные группы: Insecta и Arachnida. Большинство из них временные или постоянные эктопаразиты, существуют они как на коже, так и внутри ее, за исключением некоторых мух, личиночные стадии которых могут быть обнаружены в соматических тканях хозяина. Паразитические насекомые включают мух, вшей, блох, в то время как группа арахнид, имеющих ветеринарное значение, включает паразитиформных и акариформных клещей. Во всех случаях диагноз основывается на сборе и идентификации паразитов.
Насекомые
Взрослых двукрылых мух обычно ловят сеткой (сачком) или собирают после дезинсекции. Личинки собираются в помещениях, где содержатся животные, или берутся прямо от животных, у которых паразитируют личиночные стадии. Идентификация мух до родов достаточно проста. Основные особенности описаны в тексте. Однако идентификация родовой и видовой принадлежности личинок более сложная и основывается на исследовании особенностей дыхалец. В конце главы приводится литература по данному вопросу.
Вши и блохи
Обнаружение мелких эктопаразитов, таких, как вши и блохи, основывается на тщательном исследовании кожных покровов. Яйца вшей могут быть прикреплены к волосам или перьям. Блох обнаружить сложнее, но можно найти их фекалии в шерсти, имеющие вид темных песчинок, которые при контакте с влажной шерстью или тканью приобретают красный цвет из-за наличия переваренной крови. Это подтверждает наличие блох. При заражении большим количеством блох их можно вычесывать. Вшей можно удалять также расчесыванием или вакуумной чисткой. У мелких животных паразитов можно легко обнаружить, если животного поместить на лист бумаги, клеенки (пластика) и обработать инсектицидами. Основные особенности вшей и блох были описаны в тексте.
Паразитиформные клещи
Обнаруживаются легко на хозяине, особенно, когда они напитались кровью. При их удалении следует соблюдать осторожность, так как ротовой аппарат обычно глубоко располагается в коже. Бели кусочек ваты погрузить в анестезирующее вещество и положить на клеща, он легко выходит из ткани. Этого же можно добиться, если рядом подержать горячий предмет.
Один из самых простых методов сбора клещей с пастбища — положить одеяло на землю, к которому прикрепляются голодные клещи. Специфическая идентификация клещей описана в тексте (табл. 5).
акариформные клещи
Otodectes может обнаруживаться при исследовании наружного слухового прохода с помощью ауроскопа или при микроскопическом исследовани ушной серы. Тщательным вычесыванием и последующим микроскопическим исследованием материала (шерсти) выявляются Cheyletiella. Для обнаружения накожных и ко-жеедных клещей часто необходимо получить соскоб кожи, который затем исследуется под микроскопом. Область, выбираемая для соскоба, должна располагаться на краю участка поражения. Волосы вокруг него выстригаются. На предметное стекло помещается капля жидкого парафина, а перед взятием соскоба кончик скальпеля также помещается в парафин. Соскабливание проводится до тех пор, пока не появляется небольшое количество крови на поверхности кожи, и материал переносится на предметное стекло. Затем накладывается покровное стекло и образец исследуется под малым увеличением (х 100). Если во время начального исследования клещи не обнаруживаются, в образец на предметное стекло капают 10% каустическую соду. Через 5—10 минут препарат исследуют снова.
Хранение
Большинство взрослых членистоногих и их развивающиеся стадии можно сохранять в 70% спирте в небольшом стаканчике или пластиковом сосуде.
Протозоозы
Лабораторная диагностика проводится достаточно легко. Она удобна для практикующего врача. В некоторых случаях, однако, может потребоваться применение специальных методов и большой опыт. Ниже приводятся более простые методы.
Исследование фекалий
Метод флотации МакМастера является наиболее простым для определения наличия и подсчета ооцист кокцидий в фекалиях. Он подробно описан в разделе диагностики гельминтозов и полностью применим для диагностики протозоозов, хотя мелкий размер ооцист удлиняет микроскопическое исследование. Если у животного имеются острые клинические признаки кокцидиоза, например, присутствие крови в фекалиях и огромного (тысячи) количества ооцист, можно считать диагноз подтвержденным. к сожалению, при заражении многими другими видами кокцидий клинические признаки могут проявляться в фазу шизогонии или когда продуцирование ооцист только началось и их еще нет в фекалиях. Поэтому негативный результат не всегда указывает на то, что клинический диагноз неправильный. При менее остро протекающем кокцидиозе, связанном со снижением продукции, подсчет ооцист также не имеет большого значения.
Всегда желательно проведение патологоана-томического исследования.
Для определения паразитирующих в кише-нике простейших, например, Entamoeba, Giardia или Balantidium, небольшое количество свежих фекалий смешивается с теплым физиологическим раствором и исследуется под микроскопом с подогревом для обнаружения трофозоитов или цист. Однако их идентификация требует большого опыта, поэтому образцы лучше законсервировать и отправить в специализированную лабораторию.
Диагностика криптоспоридиоза основывается на исследовании фекальных мазков, окрашенных по Циль—Нельсену. Мелкие тонкостенные ооцисты при этом становятся красными.
Исследование крови и лимфы
Для обнаружения трипаносом, бабезий и тей-лерий, а также анаплазм, риккетсии и диагностики эперитрозооноза применяется микроскопия окрашенных мазков крови. Иногда проводится биопсия увеличенных лимфатических узлов для обнаружения трипаносом (особенно Trypanosoma brucei или Т. vivax) или шизонтов тейлерий в окрашенных мазках.
При трипаносомозе паразитемия может быть незначительной, и вероятность положительного диагноза увеличивается при исследовании толстого мазка, дегемоглобинизированного путем его погружения в воду перед окрашиванием эози-ном. Для этого капля свежей крови без антикоагулянта капается на предметное стекло. Диаметр мазка при этом составляет около 10 мм. Мазок высушивается, а затем применяется методика Филда для окрашивания.

Эта методика часто используется в полевых условиях.
Микроскопию трипаносом эффективно проводить в темном поле зрения микроскопа для обнаружения подвижных трипаносом.
В полевых условиях практикуется инокуляция мышей свежей кровью от животных, подозреваемых в заражении Trypanosoma congolense или Т. brucei. Через три дня исследуется кровь, которая берется из хвоста мышки, а затем каждый день в течение 3—4 недель.
Также при диагностике тейлериоза, трипаносомоза, включая Т. cruzi, бабезиоза, крип-тоспоридиоза и риккетсиозов может применяться метод определения специфических антител. Однако позитивный результат не всегда указывает на то, что животное больно, но возможно, что оно контактировало с патогеном ранее. Однако в случае токсоплазмоза овец подъем уровня антител через несколько недель указывает на недавнее инвазирование и активное заболевание.
Исследование кожи
Для обнаружения амастиготных паразитов в макрофагах может применяться гистологическое
исследование проб кожи, полученных методом биопсии или соскобов с краев кожных язв.
При диагностике Trypanosoma equiperdum исследуется жидкость, выделяющаяся из кожных бляшек.
Также можно использовать ксенодиагностику. Этот метод применяется для диагностики бабезиоза, тейлериоза или Trypanosoma cruzi, когда паразита бывает сложно обнаружить в крови. При этом методе промежуточный хозяин, например, клещ, кормится на подозреваемом животном в лабораторных условиях. После питания в течение нескольких недель в нем размножаются заглоченные паразитические организмы, после чего клещ убивается и исследуется на наличие инвазии.
